一分鐘帶你了解鱟試劑
鱟試劑的細(xì)胞溶解物是從海洋節(jié)肢動(dòng)物鱟變形細(xì)胞溶解物藍(lán)血中提取的生化試劑,低溫凍干,它專(zhuān)門(mén)用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)和真菌(1,3)-β-D-葡聚糖檢測(cè)。

鱟試驗(yàn)是世界上檢測(cè)內(nèi)毒素的好方法,具有簡(jiǎn)便、快速、靈敏、準(zhǔn)確的特點(diǎn),因此被歐美藥典和中國(guó)藥典指定為法定內(nèi)毒素檢查法,并被世界各國(guó)采用,鱟試劑的細(xì)胞溶解物主要產(chǎn)于美國(guó)、日本、中國(guó)等國(guó)家。
鱟試劑的質(zhì)量主要表現(xiàn)在靈敏度、自凝時(shí)間、成膠狀態(tài)三個(gè)方面:靈敏度穩(wěn)定;自凝時(shí)間不小于24h具有一定的緩沖能力和適宜的pH值;反應(yīng)后形成固體凝膠,凝膠安瓿可翻轉(zhuǎn)180度而不損壞,而質(zhì)量差的鱟試劑在存放一定時(shí)間(如半年)后,其靈敏度可能會(huì)發(fā)生變化,靈敏度的變化會(huì)改變測(cè)定結(jié)果所反映的供試品中內(nèi)毒素的容許限度,因此,必須選擇有國(guó)家批準(zhǔn)文號(hào)、質(zhì)量穩(wěn)定的鱟試劑。
鱟試劑按實(shí)驗(yàn)方法可分為凝膠法、動(dòng)態(tài)濁度法鱟試劑、終點(diǎn)濁度法鱟試劑、動(dòng)態(tài)顯色法鱟試劑、終點(diǎn)顯色法鱟試劑,都是用來(lái)定量檢測(cè)內(nèi)毒素的。
凝膠法是利用鱟試劑與內(nèi)毒素發(fā)生凝集反應(yīng)的原理,對(duì)內(nèi)毒素進(jìn)行定性檢測(cè)或半定量測(cè)定的方法,凝膠法是以觀(guān)察是否形成凝膠作為反應(yīng)的終點(diǎn),該方法簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì),無(wú)需特殊測(cè)量設(shè)備,可用于定性或半定量測(cè)定。
動(dòng)態(tài)濁度法的特點(diǎn)是:1.精確量化;2.檢測(cè)范圍寬,高時(shí)可達(dá)4個(gè)數(shù)量級(jí);3.靈敏度高達(dá)0.005EU/ml;4.操作簡(jiǎn)單,系統(tǒng)自動(dòng)檢測(cè)分析,一步到位;5.經(jīng)濟(jì)實(shí)用,所需試劑樣品量少,可減少到50LL ;6.可與微生物檢測(cè)系統(tǒng)Elx808(支持IU)和專(zhuān)用軟件TALgent配合使用,一次最多可檢測(cè)96個(gè)樣本。
終點(diǎn)顯色法和動(dòng)態(tài)顯色法屬于顯色矩陣法,顯色矩陣法是利用鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)產(chǎn)生的凝固酶使特定底物顯色并釋放多少生色團(tuán)來(lái)測(cè)定內(nèi)毒素含量的方法。
鱟試劑的制備:
1.將新鮮鱟變形細(xì)胞溶解物洗凈,用75%乙醇滅菌,心門(mén)采血,加入抗凝劑,制成10-15鱟血;
2.將鱟試劑以750 ~ 800轉(zhuǎn)/分的速度離心,棄去藍(lán)色血清,將剩余的白細(xì)胞按14的體積比加入懸液洗滌劑中,處理后加入細(xì)胞裂解劑,搖勻至血細(xì)胞完全裂解,保存,得細(xì)胞內(nèi)裂解液;
3.加入體積比為10.8~0.6的CHCl3.2~5搖勻,2.500~3.000rpm離心,收集胞內(nèi)溶液,即鱟試劑原液,加入敏化劑,預(yù)檢,再加入敏化劑,在-45~ 55分裝。
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